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MG1655

文字:[大][中][小] 2017-12-11    浏览?#38382;?b class="red">2253    

MG1655 Chemically Competent Cell 产品说明书




产品规格(CAT#: DL2030)


MG1655:                                                    100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期):                            -80℃(6个月)


基因型


K12 F- lambda- ilvG- rfb-50 rph-1


产品说明

MG1655菌株来源于W1485,是K12的衍生菌株,是一种经过较少改造,比较接近于“WT-野生型”的大肠?#21496;?#24037;程菌株。MG1655外观形态标准,同时可做为扩增大肠?#21496;鶺T型基因的模板使用,也可作为蛋白表达的宿主菌株使用,但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量?#32454;擼?#25552;取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶,以防提取的质粒被降解。pUC19质粒检测转化效率>0.5×108 cfu/μg DNA。


操作方法

1. MG1655感受态细胞从-80℃拿出,?#26438;?#25554;入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用?#26893;?#25171;EP管底轻轻混匀(避免?#20204;?#21560;打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,?#26438;?#25918;回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15 h。


注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物?#19978;?#24212;减少最终用于涂板的菌量。





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