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GT115

文字:[大][中][小] 2017-7-19    浏览?#38382;?b class="red">1877    

GT115 Chemically Competent Cell 产品说明书 




产品规格(CAT#: DL1090)

GT115:                                                      100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期):                            -80℃(6个月) 



基因型

F- mcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15?lacX74 recA1 rpsL (StrR) endA1 ?dcm uidA(DMluI)::pir-116?sbcC-sbcD


产品说明

GT115菌株,是专门用来克隆含有发夹结构(Hairpin)或重复序列等DNA二级结构的基因序列的大肠?#21496;?#33740;株。大肠?#21496;?#20013;存在一种SbcCD蛋白复合体,可以识别DNA发夹结构,并将其切除;将sbcCsbcD两个基因突变,增强了发夹结构DNA的稳定性。同时在大肠?#21496;?#22522;因组中引入uidA(DMluI)::pir-116,使GT115可以表达 兀 蛋白,含有R6Kg ori复制子的质粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常复制。该菌株还含有具有核酸酶 (endA)突变、重组酶 (recA)突变,增强了外源DNA的稳定性。GT115感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19检测转化效率>2×108 cfu/μg DNA。



操作方法

1. GT115感受态细胞从-80℃拿出,?#26438;?#25554;入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用?#26893;?#25171;EP管底混匀(避免?#20204;?#21560;打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,?#26438;?#25918;回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,?#21830;?#39640;转化效率)。

4. 37℃,225 rpm复苏60分钟。

5. 5000 rpm离心1分钟?#31449;?#30041;取100 μl左右上清吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。

6. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


 

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。转化高浓度的质粒或高效率的连接产物?#19978;?#24212;减少最终用于涂板的菌量。

2. ?#21496;?#26666;具有链霉素抗性,拥有这种抗性的质粒无法使用






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