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TOP10F`

文字:[大][中][小] 2015-9-1    浏览?#38382;?b class="red">2596    

TOP10F` Chemically Competent Cell 产品说明书





产品规格(CAT#: DL1011)

TOP10F`:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期):                            -80℃(6个月)


基因型

F′{lacIq Tn10 (TetR)} mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nup

 

产品说明

TOP10F`菌株来源于TOP10菌株。将F`{lacIq Tn10 (TetR)}因子转入TOP10菌株,?#27425;猅OP10F`。该F`因?#26377;?#24102;lacIq 抑制子,可抑制trc,tac,lac等启动子下游基因的表达,从而可以用于一些表达毒性蛋白质粒的扩繁。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆,蓝白斑筛选(如用于蓝白斑筛选,需在培养基中加入IPTG诱导β-半乳糖苷酶基因的表达)实验,具有四环素抗性。TOP10F`感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。


操作方法

1. TOP10F`感受态细胞从-80℃拿出,?#26438;?#25554;入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用?#26893;?#25171;EP管底轻轻混匀,冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,?#26438;?#25918;回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YTLB),混匀后37℃200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YTLB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少13 h。


注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物?#19978;?#24212;减少最终用于涂板的菌量。






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